Laadukas adenosiinideaminaasimäärityssarja

Adenosiinideaminaasi (ADA) on luonnollinen entsyymi, joka osallistuu immuunivasteeseen. Adenosiinidifosfaatin (ADP) tehtävänä on aktivoida soluja ja suorittaa kalvon läpäisevyys ja sytotoksinen vaikutus. Adenosiini on tunnistettu yhdeksi tärkeimmistä aminohapoista, joita tarvitaan ihmisen normaaliin aivotoimintaan. Se syntetisoituu maksassa ja jakautuu veriplasmaan immuunijärjestelmän toiminnan kautta. Adenosiinidifosfaatti on antiviraalisen geneettisen materiaalin kantaja. Biomedical Expossa ADA Activity Assay Kitiä käytetään yhdessä aiemmin mainitun BioVision Cytokiinin kanssa.

Adenosiinidifosfaatti (ADP) on T-lymfosyyttien kasvutekijän kantaja. BioVision Cytokine -laitteessa adenosiinideaminaasi (ADO) uutetaan leikatusta munuaisesta ja analysoidaan käyttämällä kaupallisesti saatavaa spektrofotometristä automatisoitua määritystä. Reagenssi esikäsiteltiin anti-fosfo-dglukoosilla (PI) sen reaktion estämiseksi analyytin kanssa.

Kaupallisesti saatavan AIDA Activity Assay Kitin koostumus sisältää kaksi pääkomponenttia - reagenssin ja laboratoriolaitteiston. Aida Activity Assay Kitin sisältämiin reagensseihin kuuluu puhdistettu entsyymicocktail (Sigma-FCA). Laboratoriolaitteisto koostuu mikrolevyskannerista (asennettu lasimikroskoopin objektilasin taakse), lasiesineistä, vakiokäyrätuloskirjasta ja huuhtelupullosta. Ennen käyttöä Aida Activity Assay Kitin näytteet on pestävä kloorittomalla vedellä. Reagenssien ja laboratoriolaitteiden käyttö ei rajoitu pelkästään laboratoriotesteihin.

Aida Activity Assay Kitin kykyä mitata adenosiinideaminaasin kokonaisaktiivisuutta tutkittiin useita kokeellisia istuntoja. Ensimmäinen istunto käsitti neljä päivää manuaalista jäljitystä. Sataviisikymmentä mikrolitraa Aida-GFP:tä liuotettiin vesijohtoveteen ja sekoitettiin fosfaattipuskuroidun suolaliuoksen kanssa. Kahdenkymmenen minuutin kuluttua näytteet testattiin HPLC-massatasenäytöllä.

Toinen istunto sisälsi kaksi lisäpäivää manuaalista jäljitystä. Näytteitä injektoitiin käyräkasetille kahdeksi tunniksi edellä kuvatulla tavalla. Kolmas istunto sisälsi kolme lisäpäivää manuaalista jäljitystä samassa huoneessa, mitä seurasi neljä tuntia ihonalaisia ​​adenosiinideaminaasin (ADCA) injektioita. Verinäyte otettiin tunnin kuluttua analysointia varten.

Sylkitestiä varten 500 mikrolitraa deaminaasin ja pH-arvon standardiliuoksia sekoitettiin ei-steriilissä lävistimessä. Sikojen annettiin juoda monenlaisia ​​nesteitä tavallisesta vedestä ruokasoodaan haluttaessa. Kun standardiliuokset saavuttivat kiehumispisteensä, pistorasia, jossa oli ennalta määrätty tilavuus sylkeä, laitettiin sisään ja adenosiinideaminaasiaktiivisuus mitattiin.

Viimeinen kuuden näytteen ryhmä analysoitiin käyttämällä kaupallisesti saatavilla olevaa sylkipohjaista fosforimidatsoliamiinimäärityssarjaa (Saproflavil; Thermo Instruments). Tässä määrityssarjassa yksi tippa fosforimidatsoliamiini/sylki-ada-reagenssia sekoitettiin tilavuuteen vesijohtovettä ja kuivattu jauhe lisättiin näytteisiin. Kolmenkymmenen minuutin kuluttua otettiin toinen näyte samasta näytteestä. Tässä tapauksessa syljen aktiivisuus mitattiin välittömästi. Sarja oli erityisesti suunniteltu mittaamaan hapon aktiivisuutta ihmisen syljessä. Kuten odotettiin, havaittiin huomattava määrä toimintaa.

Kuten odotettiin, molemmat analysaattorit tuottivat samanlaisia ​​tuloksia. Sylkipositroniemissiotomografian (SPECT) analyysin erittäin spesifinen luonne yhdessä erittäin herkän metodologian (korkea intraoraalinesteen havaitseminen) kanssa johtivat jatkuvasti korkeaan tarkkuuteen ja merkittäviin mittauksiin. Toimenpiteisiin käytetty laboratoriohenkilöstö oli kaikki alan asiantuntijoita. Ei ollut näyttöä kontaminaatiosta tai minkäänlaisesta koevirheestä. Koehenkilöt antoivat tietoisen suostumuksen ja menettely noudatti American Association of Clinical Endokrinologists -järjestön suosituksia. Kaiken kaikkiaan Adenosine Deaminase Assay Kitistä saadut tulokset osoittivat hyvää toistettavuutta, minkä vahvistivat erilliset tutkimukset riippumattomista kliinisistä laboratorioista.