NEFA Assay Kit on työkalu NEFA:n kvantifiointiin

NEFA Assay Kit on työkalu NEFA:n (typpioksidin) kvantifiointiin. Sitä käytetään NEFA-pitoisuuden määrittämiseen veri- tai kudosnäytteistä. NEFA on elintärkeä ravintoaine, joka on vastuussa energia-aineenvaihdunnan, sydämen kiihtyvyyden, hermo-lihasjohtavuuden, verenpaineen ja veren hyytymisen säätelystä. Sitä esiintyy pääasiassa luussa, lihaksissa, pehmytkudoksissa ja punasoluissa.

Valmistautuminen

NEFA on pieni, 50,2 kDa:n proteiini, jolla on kyky sitoutua DNA:han. Se on sytosolinen tyypin I rasvahapposyntaasi (FAS) -kompleksi, joka tuottaa esteröimätöntä palmitiinihappoa. Asyyli-CoA-oksidaasin (ACS) läsnä ollessa FAS-kompleksi hapettaa 3-metyyli-N-etyyli-N-(b-hydroksietyyli)aniliinin 4-aminoantipyriiniksi, joka on asetyyli-CoA:n molekyyliprekursori. Tämä prosessi on ratkaiseva entsymaattinen prosessi kaikille eukaryoottisille organismeille.

Vaikka NEFA:lla ei välttämättä ole rasvan massaa, se on tärkeä polttoaineen lähde ääreiskudoksille. Se metaboloituu maksassa ja kuljetetaan kompleksoituneena albumiinin kanssa perifeerisiin kudoksiin. NEFA:ta vapauttaa myös FAS-kompleksin tioesteraasi (TE) -domeeni.

Pipetointi

ELISA-sarjoja käytetään pienten kemiallisten yhdisteiden, proteiinien ja peptidien havaitsemiseen. Nämä sarjat perustuvat E. colissa ilmennettyihin rekombinanttiproteiineihin. Sarjat eivät sisällä atsidia, timerosaalia tai muita luonnonvaroja.

Pakkauksessa on reagensseja, kuten BSA, pyrogeeniton laimennuspuskuri ja pesuliuos. Pesuliuos on stabiili kaksi viikkoa 2-8 asteessa. Laimennuspuskuri sisältää 0,9 % fysiologista suolaliuosta.

Sarjassa on sisäinen NEFA-standardi. Tähän lisätään NEFA:ta pitoisuudessa, joka vastaa näytteen odotettua pitoisuutta. Sinipurppuranvärisen pigmentin absorbanssi 546 nm:ssä mitataan näytteen NEFA-konsentraation laskemiseksi.

Kolorimetrinen

WAKO NEFA -sarjan käyttäminen on saanut aikaan erilaisia ​​tuloksia, myös järjettömiä. Siitä huolimatta NEFA-sarja on varteenotettava kilpailija määritettäessä eläinkudosnäytteiden suhteellista rasvahappopitoisuutta. Sellaisenaan NEFA-sarja on yksi suosituimmista laboratoriotesteistä. Sarjan mukana tulee ohjeet erityyppisten näytteiden, mukaan lukien veren, seerumin, syljen ja erilaisten lipidien, testaamiseen.

Sarjan jännittävin osa on, että sillä voidaan mitata erilaisia ​​rasvahappoja, mukaan lukien ne, joita yleisesti esiintyy lipideissä. Sarjan mukana tulee joukko entsyymejä, jotka on suunniteltu havaitsemaan erilaisia ​​rasvahappoja, mukaan lukien ihmisissä ja eläimissä esiintyvät C-8- ja C-16-rasvahapot. Sarjaa ei kuitenkaan suositella käytettäväksi erittäin tarkoissa FFA-pitoisuuksissa laajalla alueella.

Sähkökemiallinen

NEFA:t ovat tärkeitä rasvahappoja ihmisten terveydelle, mutta niitä arvioidaan harvoin. Lisäksi niiden havaitseminen on erittäin kallista. Siksi niiden pitoisuuksien muutosten seuranta voi auttaa tarkempaan sairauksien ehkäisyyn ja hallintaan. Tässä tutkimuksessa kehitettiin sähkökemiallinen määrityssarja NEFA:lle käyttäen PDA-MWCNT:tä anturin pintana. Tällä elektrodilla oli hyvä elektrokatalyyttinen aktiivisuus NEFA-hapetusvaiheissa, ja sitä voitiin käyttää tosielämän sovelluksissa.

Entsyymielektrodi koostui PDA-MWCNT:n ja ACOD:n, ACS:n ja polymeerin monikerroksisesta komposiittikalvosta. Kerrosten järjestys valittiin vastaamaan entsymaattisen reaktion järjestystä. Määritettiin, että ACS ja ACOD pysyivät biologisesti aktiivisina kalvossa.

NEFA-pitoisuus T2D:ssä

Veren NEFA-pitoisuuksia on tutkittu liikalihavuuden ja verenpainetaudin yhteydessä. Näiden yhdisteiden on osoitettu edistävän verenpaineen nousua a1-adrenergisen stimulaation kautta ja lisäävän hapetusstressiä. NEFA:t liittyvät myös metaboliseen oireyhtymään. Nämä yhdisteet voivat olla tärkeitä verenpainetaudin kehittymisessä.

Useita malleja on ehdotettu kuvaamaan plasman NEFA-vastetta suonensisäiseen glukoosialtistukseen. Bostonin malli kuvasi tarkasti NEFA-pitoisuuden nousun neljännen vaiheen. Malli ei kuitenkaan kuvannut alkuperäistä latenssivaihetta. Fabian-mallissa käytettiin yksinkertaista eksponentiaalista kaltevuutta kuvaamaan tätä vaihetta. Samoin Thomasethin malli ei kyennyt kuvaamaan palautumisvaihetta.

NEFA-tasot triglyserideissä

Useat tutkimukset ovat tutkineet bariatrisen leikkauksen vaikutuksia plasman NEFA-koostumukseen. Vuonna 2016 julkaistussa meta-analyysissä seerumin NEFA-tasot laskivat 6 ja 12 kuukauden kuluttua leikkauksesta. Tämä saattoi johtua alentuneesta insuliinitasosta. Toisessa tutkimuksessa plasman NEFA:t mitattiin liikalihavien potilaiden ryhmässä ennen ja jälkeen Roux-en-Y mahalaukun ohitusleikkauksen.

Seitsemän NEFA:n pitoisuudet laskivat 9 kuukauden kuluttua leikkauksesta. Linoleaatti (omega-6-rasvahappo) väheni 18:2, stearaatti 18:0 ja oleaatti 16:0. Dokosaheksaenoaatin pitoisuuteen ei kuitenkaan vaikuttanut. NEFA:t muutettiin rasvahappojen metyyliestereiksi (FAME). Nämä analysoitiin sitten kaasukromatografia-massaspektrometrialla (GC-MS).